利用RRLC改善西洋參HPLC的分離速度和靈敏度
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系統：Agilent 1200快速高分離度液相色譜（RRLC），包括：在線脫氣機（G1379B），SL型二元泵（G1312B），SL型自動進樣器（G1367C），SL型柱恒溫箱（G1316B）和SL型二極管陣列檢測器（G1315C）。
檢測池：2μl
峰寬：0.01min（0.2s）
狹縫：4nm
進樣器后管線內徑：0.12mm（Seat Capillary為0.17mm）
色譜柱：ZORBAX SB C18 RRHT色譜柱，4.6×50mm，1.8
流動相：A為0.1%的H3PO4，B為乙腈，梯度分離
柱溫：25℃
流速：2ml/min
檢測波長：203nm
進樣量：5μl
RRLC分離的梯度重現性
使用RRLC系統進行快速分離不僅可以獲得速度、分離度與靈敏度的改善，同時可以保持液相色譜分離技術的杰出重現性（見圖4）。
圖4 西洋參分析中RRLC梯度分離的重現性，色譜條件同圖3RRLC和HPLC的轉換
RRLC的良好兼容型與靈活性，使用戶可以根據需要在同一儀器硬件上靈活使用常規HPLC色譜柱和RRLC色譜柱。而鍵合相品牌豐富的ZORBAX RRHT色譜柱（如SB、XDB、Extend、Eclipse Plus等），又為相同品牌、不同粒徑填料之間方法的相互轉換提供了便利條件，使RRLC與HPLC之間方法的相互轉換非常方便。基于現有RRLC分離條件，也可以非常容易地獲得相應HPLC的分離方法。只需用Method Translator將參數進行直接轉換，即可獲得根據RRLC方法優化參數相應的HPLC條件參數。本研究使用相同的RRLC系統和HPLC色譜柱，獲得了分離選擇性與RRLC幾乎完全相同的HPLC分離結果（見圖5）。
圖5 西洋參分析中HPLC與RRLC分離色譜圖比較值得注意的是：與RRLC相比，HPLC在相同進樣量時獲得的色譜峰高較低，故相對靈敏度較低。同時，分離時間也大大加長，溶劑消耗亦相應提高。
討論與結論
－中國藥典的藥物分析方法中并未指定色譜柱品牌。而不同品牌、相同鍵合相的色譜柱又存在不同的選擇性差異，故直接應用藥典方法時往往需要對方法進行調整或優化，尤其是對于復雜樣品的分離而言。使用小顆粒短柱的RRLC分離可以顯著加快分離速度，故可以大大縮短方法開發和優化過程所需的時間。如此獲得的RRLC分離條件，又可以簡單方便地轉換成常規HPLC方法，并在RRLC系統上實現HPLC分離。所以，使用RRLC系統進行分離會大大提高工作效率。
－RRLC分離不僅可以大幅度縮短分析時間，而且能夠降低溶劑消耗。
－RRHT色譜柱擁有與常規HPLC內徑相同的4.6mm色譜柱，使之可以接近或保持與HPLC相同的進樣量。與HPLC相比，在保持相同進樣量的前提下，使用小顆粒填料的RRLC可以顯著改善分離靈敏度。
－RRLC可以在快速分析中仍然保持出色的分離重現性。
－不同色譜柱具有不同的選擇性，因而可以造成方法轉換中的分離狀況變化。選擇具有相同鍵合相品牌的不同顆粒色譜柱，會簡化HPLC與RRLC方法之間相互轉換中的參數優化過程。ZORBAX系列RRHT色譜柱涵蓋了非常豐富的鍵合相品牌，如SB、XDB、Eclipse Plus、Extend等，方便用戶靈活選擇與HPLC相同品牌鍵合相的小顆粒填料。
－溫度對色譜柱選擇性的調節作用不可小視。RRLC具有制冷功能的柱溫箱，不僅溫度控制范圍寬（室溫以下15～100℃），而且控溫精確高（±0.05℃），即便在室溫以下亦能精密控溫。快速、精確的溫度調節與控制能力，不僅保證了分離的保留時間重現性，而且為用戶利用溫度進行選擇性調節提供了極大的便利。
色譜條件
色譜柱：ZORBAX SB C18 4.6×150mm，5
流動相：A為0.1%H3PO4，B為乙腈，梯度分離
流速：1ml/min
其它條件同圖2。(end)
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