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        一招變身檢測熒光達人

        作者: 時間:2014-01-08 來源:網絡 收藏

          讓我們再來看一個激發塊的光譜圖:

        上圖為olympus U-FGW激發塊的光譜信息,可以看出此激發塊可以提供的激發光在530-560nm左右,允許透過的熒光光譜范圍在570nm以上,所以此激發塊并不適合DAPI激發。如果用此激發塊來做DAPI的觀察,就會出現看不到熒光的現象。

          可見,要選擇合適的熒光激發塊,我們首先要知道熒光染料激發和發射光的波長特性和激發塊光譜的各項數據。但是,熒光染料和濾色片的種類非常多,用戶往往沒有渠道來獲取這些信息。在實際實驗中使用熒光顯微鏡時,因為熒光激發塊配置錯誤而得不到好的觀察效果的現象經常發生,對于用戶來說是一件非常煩惱的事。

          為了方便用戶正確選擇激發和,節省時間,日本理化研究所腦科學所-奧林巴斯合作中心(the RIKEN BSI-Olympus Collaboration Center : http://rikenbocc.brain.riken.jp/index_e.html)開發了軟件Spectrum Manager。用戶選擇熒光染料,軟件會給出染料的光譜信息和推薦的濾色片選擇等信息,使用非常方便。

          還可利用Data Manager自行對光源信息、染料數據庫或濾色片信息進行更新。

          此款軟件已經整合至奧林巴斯共聚焦顯微鏡的一款軟件中,發布以來得到了用戶非常好的反響。因此,現將該軟件開放給所有顯微鏡使用者,供大家免費使用。

          下載地址:http://cn.olympus.com/smkx_second/second.aspx?nodeid=187page=ContentPagecontentid=1011

          由于是針對共聚焦顯微鏡的軟件,所以軟件中僅提供了激光光源譜線。如果您有需要,也可以將汞燈和氙燈光源信息導入至軟件。

          以下提供普通熒光顯微鏡常用的汞燈和氙燈光源的圖譜,供大家參考。

          汞燈在313, 334, 365, 406, 435, 546, and 578nm有比較好的激發峰。

          氙燈在可見光光譜范圍內強度更穩定(沒有像汞燈那樣的光譜峰值),在紅外波段比汞燈強度高。但在紫外波段有一定的缺陷性。

          所以選擇光源時,光源特性要與我們的具體應用相匹配。


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